INTRODUÇÃO
Síndrome hepatopulmonar (SHP) é formada pela entidade clínica composta por uma tríade: doença hepática crônica, dilatação vascular intrapulmonar e alteração nos gases arteriais. Esta condição está presente em 4% a 32% dos pacientes com cirrose. A sua fisiopatogênese não está bem definida, mas especula-se uma combinação de fatores, tais como o desequilíbrio na resposta dos receptores de endotelina, a remodelação microvascular pulmonar e predisposição genética, levando à dilatação vascular intrapulmonar e translocação bacteriana1,4,5,8.
As características fisiopatológicas vem sendo estudadas a partir do modelo estabelecido de SHP experimental, induzida pela CBDL. São relatadas alterações da microvasculatura pulmonar, incluindo a vasodilatação, o acúmulo de monócitos intravascular e angiogênese1,4,8,9. Alguns autores demonstraram que o aumento na expressão de óxido nítrico sintase induzível (iNOS) nos pulmões dos animais operados (CBDL) pode também contribuir para a produção local de óxido nítrico durante a progressão da SHP1,4,7,8.
A fisiopatologia da entidade não é completamente compreendida, de modo que o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade da mieloperoxidase (MPO) no modelo de SHP em ratos.
MÉTODOS
Animais
Ratos Wistar machos (200-250 g, LIM 37/USP, São Paulo, Brasil) foram alojados em 19ºC±3ºC, com um ciclo de 12 h (6:00-18:00 horas) de luz artificial. Dois ou três animais do mesmo grupo de tratamento foram alojados por gaiola. Os animais tiveram livre acesso à água e comida padrão durante todo o experimento. A ingestão de alimentos não foi medida. O estudo foi conduzido de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório e as Diretrizes de Experimentação Animal da Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina, São Paulo, SP, Brasil.
Desenho do estudo
Os animais foram submetidos à cirurgia de ligadura do ducto biliar comum (CBDL grupo n=20) como anteriormente descrito2,3. O grupo sham (n=10) foi submetido à laparotomia e mobilização do ducto biliar comum. O grupo controle (n=5), apenas submetidos à análise. Todos os procedimentos se iniciaram com os animais anestesiados com 5% de cloridrato de cetamina 30 mg/kg (Ketalar ®, Cristália), e foi administrada dose de manutenção quando necessário. Os animais foram mantidos aquecidos com lâmpadas halógenas 45 W, 127 V. A temperatura corporal foi monitorizada por termômetro digital retal (YSI 4000A termômetro de precisão, EUA) e mantida entre 35ºC e 37ºC.
Atividade da mieloperoxidase
A MPO foi utilizada como um indicador de neutrófilos no pulmão6. As amostras foram homogeneizadas em PBS contendo 0,5% de hexadecil e EDTA 5 mM, pH 6,0, sonicadas e centrifugadas a 3000 xg durante 30 min. O sobrenadante foi medido espectrofotometricamente para a atividade de MPO com base na densidade óptica (460 nm) que muda devido à decomposição de H2O2 na presença de o-dianisidina. Os resultados foram expressos como DO a 460 nm.
Método estatístico
A análise estatística foi realizada utilizando GraphPad Prism Software ®. As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. Os dados foram apresentados como média±desvio padrão (DP) para as variáveis contínuas. As comparações entre os grupos foram feitas utilizando uma análise de variância Kruskal-Wallis (não paramétrico ANOVA) e post-hoc teste de Dunn- Bonferroni foi utilizado para realizar comparações múltiplas.
RESULTADOS
Neste estudo, foram utilizados 20 ratos para o modelo experimental de SHP (CBDL). O grupo sham foi composto por 10 animais. O grupo controle foi composto por cinco. Após decorridos os 28 dias do procedimento cirúrgico, os achados macroscópicos no grupo CBDL mostrou evidência de doença hepática em todos os ratos operados. Estatísticos significativamente foram os achados laboratoriais observados no grupo SHP experimental, observando elevação das enzimas hepáticas (AST, ALT), bilirrubinas total e direta e GGT, quando comparados aos grupos controle e sham. A avaliação dos gases no sangue arterial no grupo CBDL apresentaram níveis mais baixos de PO2 e saturação de O2.
A avaliação da atividade da MPO (Figura 1) mostrou que os níveis foram significativamente aumentados no grupo CBDL em comparação aos outros grupos. Atividade da MPO foi maior no grupo CBDL que o grupo controle (p<0,05) e o grupo sham (p<0,05).
DISCUSSÃO
Neste estudo, como demonstrado por alguns autores, a indução de cirrose biliar por CBDL em ratos é um modelo experimental estabelecido para o SHP2,3.
Os níveis da atividade MPO foram significativamente maiores no grupo CBDL em comparação com os outros grupos. A atividade dela em modelos de cirrose com SHP foi explorado antes por outros autores que propuseram a MPO estar envolvida na regulação da expressão do iNOS6.
Os principais achados da SHP experimental são dilatação da microvasculatura pulmonar e angiogênese que levam à anormal troca gasosa pulmonar7. No entanto, o acúmulo de monócitos no intravascular e a angiogênese devem ser um ponto importante neste fisiopatologia9.
CONCLUSÃO
A atividade da MPO fica aumentada na SHP experimental em ratos.
AGRADECIMENTOS
Ao Laboratório de Epidemiologia e Estatística do Departamento de Gastroenterologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo, SP, Brasil.
REFERÊNCIAS
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2. Fallon MB, Abrams GA, McGrath JW, Hou Z, Luo B: Common bile duct ligation in the rat: a model of intrapulmonary vasodilatation and hepatopulmonary syndrome. Am J Physiol 1997,272(4 Pt 1):G779-784. [ Links ]
3. Kountouras J, Billing BH, Scheuer PJ: Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat. Br J Exp Pathol 1984,65(3):305-311. [ Links ]
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Correspondência:
Lucas Souto Nacif
E-mail: lucasnacif@usp.br
